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        重癥肌無力抗體的測定步驟如下
        發布時間:2022-01-21   點擊次數:277次
          重癥肌無力(myastheniagravis,MG)是一種T細胞依賴的乙酰膽堿受體抗體(AChR-Ab)介導的自身免疫性神經肌肉接頭處的疾病。MG的基本病理機制是AChR-Ab介導的神經肌接頭終板突觸后膜上乙酰膽堿受體(AChR)數量的減少。乙酰膽堿受體抗體是MG主要的自身抗體,由自身反應性T淋巴細胞激活體內的B淋巴細胞產生。FcyRIIB是細胞表面免疫球蛋白IgG的Fc段受體之一,是一個能與IgG的Fc段低親和力結合的抑制性受體,也是表達于B淋巴細胞表面的免疫球蛋白受體,在調節免疫反應中具有重要作用。
          重癥肌無力抗體的測定步驟如下:
          1.抗原包被:用PH值9.6的碳酸鹽/碳酸氫鹽緩沖液將純化的AChR以0.5ug/ml的濃度進行稀釋,按每孔0.1ml小心加入酶標板各孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產生氣泡。然后用封板膜封好反應孔,放在4℃冰箱中12小時過夜。
          2.洗滌:倒盡板孔中液體,吸干孔內殘余反應液,空干,加滿洗滌液晃動2min,倒去,反復4次,將反應板倒置在吸水紙上,拍干。
          3.封閉:在各反應孔中加滿含2%牛血清蛋白的PH值7.4/0.01M的PBS,室溫下孵育30min。
          4.加血清:按上述方法再洗滌4次后,在各反應孔中加入用0.01M,PH值為7.4的PBS-Tween20稀釋100倍的MG患者的血清0.1ml,每份標本做兩孔檢測,留2孔為空白對照。用封板膜封好各反應孔,37℃水浴90min。
          5.加HRP-羊抗人IgG抗體:按上述方法洗滌4次后,在各反應孔中加入用0.01M,PH值為7.4的PBS-Tween20稀釋1000倍的HRP-羊抗人IgG抗體0.1ml,用封板膜封好各反應孔,37℃水浴90min。
          6.加底物:按上述方法洗滌4次,在各反應孔中加入顯色劑A液和顯色劑B液各70ul,用封板膜封好各反應孔。避光顯色10min。
          7.加終止液:在各反應孔中加入終止液50ul,終止顯色反應。
          8.結果判讀:根據有無顯色反應判定結果的陰、陽性。
          9.終止顯色反應30min內在酶標儀上讀取450mm/630mm的OD值。將MG患者的OD值減去空白對照的OD值即為結果,每份血清的結果為兩孔平均值。該結果與血清中抗AChR-lgG水平為半對數關系,OD值越高則血清中抗AChR-IgG的水平越高。
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