N型鈣離子通道蛋白N-VGCC抗體ELISA試劑盒
僅供科研使用
N型鈣離子通道蛋白N-VGCC抗體ELISA試劑盒
神經免疫相關-N型電壓門控鈣通道自身抗體
1.預期用途: RSR 公司的N型電壓門控鈣通道自身抗體RIA檢測(N-VGCC Ab RIA)試劑盒專用于定量檢測人血清中N型VGCC 自身抗體(N-VGCCAb),僅供專業技術人員操作使用。
2.檢測意義: 與N-VGCC 反應的血清自身抗體最初在與Lambert-Eaton肌無力綜合征(LEMS)特異性相關的神經肌肉接頭功能障礙中被報道。隨后,在中樞神經系統疾病,包括小腦變性和副腫瘤性自身免疫,特別是與小細胞肺癌(SCLC)相關的疾病中檢測到N-VGCC 抗體。功能性N-VGCC由一個成孔的α1 亞基和輔助亞基β,γ,α2/δ組成,廣泛表達于中樞和外周神經系統。N-VGCC抗體主要與α1亞基結合。該試劑盒使用簡單,為N型VGCCAb 提供了一種特異而靈敏的檢測方法,是對RiaRSRTMVGCCAb RIA 試劑盒的補充,用于檢測P/Q 型VGCC 自身抗體。
3. N型電壓門控鈣通道自身抗體RIA檢測試劑盒特性: 臨床特異性:用本試劑盒對59名健康志愿者血清進行檢測,58例98.3%)均診斷為VGCC抗體陰性。 臨床靈敏性:用本試劑盒對20例血清呈P/Q-VGCC抗體陽性的患者進行檢測,6例(30%)均被診斷為N-VGCC抗體陽性。 臨界值:陰性≤ 110 pmol/L; 陽性 >110 pmol/L
4.樣本要求: 15µL 血清/人份(1:10稀釋后每管為50 µL),避免使用脂血、溶血及血漿樣本。
5.組分性狀: 25孔板,液體和凍干粉。
6.檢測原理: RSR N型電壓門控鈣通道自身抗體RIA檢測試劑盒采用放射免疫沉淀法原理,將從兔小腦提取的P型VGCC蛋白復合物,并經過表面活性劑增溶及125I -ω-芋螺毒素MVIIC標記,形成125I-VGCC(放射標記抗原)?;颊哐逯蠽GCC 自身抗體與檢測抗原相結合后,同抗人免疫球蛋白G抗體形成免疫沉淀。免疫沉淀物的放射量與血清樣本中抗體水平成正比,即自身抗體的濃度越高,免疫沉淀物的放射性就越強。
7. 實驗步驟: 使用前所有試劑組分(除緩沖液外)需室溫放置(20-25 ℃)至少 30 分鐘。 | 加樣: | 50 μL陰性質控品(B)(直接使用,不用稀釋)、陽性質控品(C 1-2) (直接使用,不用稀釋)和稀釋的患者血清(用緩沖液1: 10稀釋) |
加樣: | 50 μL 125I標記的N-VGCC(A) (新鮮復溶)加入每個管子和兩個額外的空管中用于總計數。 | 試管: | 蓋好試管,使用旋渦混合器輕輕混勻。 | 孵育: | 2-8 ℃下,16-20 小時 | 加樣: | 每管(不包括兩個總計數管)加入50 μL抗人IgG(D)。 | 試管: | 蓋好試管,使用旋渦混合器輕輕混勻。 | 孵育: | 2-8 ℃下,1.5 小時 | 加樣: | 每管(不包括兩個總計數管)加入1 mL冷的緩沖液(E)。 | 試管: | 使用旋渦混合器輕輕混勻 | 試管: | 4℃下 1500 g 離心 20 分鐘 | 試管: | 棄去上清液 | 加樣: | 每管(不包括兩個總計數管)加入1 mL冷的緩沖液(E)。 | 試管: | 旋渦混合器重懸沉淀 | 試管: | 4 ℃下 1500 g 離心 20 分鐘 | 試管: | 棄去上清液 | 使用γ射線計數儀對每管計數 1分鐘 |
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